里氏木霉木聚糖酶XYNⅡ基因在毕赤酵母中的分泌表达

林产化学与工业 ›› 2007, Vol. 27 ›› Issue (5): 83-88.

里氏木霉木聚糖酶XYNⅡ基因在毕赤酵母中的分泌表达

欧阳嘉^1,2, 王向明², 张清², 严明², 许琳²

1. 南京林业大学化学工程学院, 江苏南京 210037;2. 南京工业大学制药与生命科学学院, 江苏南京 210009

收稿日期:2006-11-25 修回日期:1900-01-01 出版日期:2007-10-30 发布日期:2007-10-30

Secretory Expression of Trichoderma reesei XYN Ⅱ Gene in Pichia pastoris

OUYANG Jia^1,2, WANG Xiang-ming², ZHANG Qing², YAN Ming², XU Lin²

1. College of Chemical Engineering, Nanjing Forestry University, Nanjing 210037, China;2. College of Life Science and Pharmacy, Nanjing University of Technology, Nanjing 210009, China

Received:2006-11-25 Revised:1900-01-01 Online:2007-10-30 Published:2007-10-30

摘要/Abstract

摘要： 采用RT-PCR方法克隆到里氏木霉Rut C-30木聚糖酶(XYN Ⅱ)的cDNA序列.测序结果表明,XYN Ⅱ的cDNA基因开放阅读框长度为669bp,编码223个氨基酸,N端1～19个氨基酸为潜在的信号肤序列,删去潜在信号肽序列,将里氏木霉木聚糖酶的基因(xyn Ⅱ)构建到巴斯德毕赤酵母分泌表达载体pPIC9K上,线性化后电击转化到巴斯德毕赤酵母中,经G418筛选和PCR鉴定后的转化子用1%的甲醇进行诱导,对重组木聚糖酶活检测显示该基因能在毕赤酵母中表达有生物活性的XYNⅡ并分泌到胞外.发酵液中的酶活在诱导培养0h达到1.45IU/mL,最适酶解温度为50℃,最适pH值为6.0.

关键词: 里氏木霉, 木聚糖酶, 毕赤酵母, 分泌表达

Abstract: The gene of xylanase(XYN II) was amplified by RT-PCR from the total RNA of Trichoderma reesei Rut C-30 and sequenced. The gene comprised an open reading frame that encoded a polypeptide of 223 amino acid residues, containing a signal peptide of 19 amino acid residues. A recombinant plasmid pPIC9K-xyn II was constructed by inserting gene xyn II into Pichia pastoris secretory vector pPIC9K. Linearized pPIC9K-xyn II was transformed into P.pastoris GS115 with the method of electroporation. The recombinant strain identified by G418 selection and confirmed by PCR analysis was induced by 1.0% methanol at 28℃ to express the recombinant xylanase, the highest enzyme activity of 1.45 IU/mL was detected for 60 h incubation. The optimal pH value and temperature of the enzyme activity is 6.0 and 50℃, respectively.

Key words: Trichoderma reesei, xylanase, Pachia pastoris, secretory expression

中图分类号:

TQ91
Q786

欧阳嘉;王向明;张清;严明;许琳. 里氏木霉木聚糖酶XYNⅡ基因在毕赤酵母中的分泌表达[J]. 林产化学与工业, 2007, 27(5): 83-88.

OUYANG Jia;WANG Xiang-ming;ZHANG Qing;YAN Ming;XU Lin. Secretory Expression of Trichoderma reesei XYN Ⅱ Gene in Pichia pastoris[J]. , 2007, 27(5): 83-88.

[1]	罗文, 王治元, 苗长林, 吕鹏梅, 何东, 李惠文, 杨玲梅, 袁振宏. 米黑根毛霉脂肪酶在毕赤酵母中的高效表达及酶学性质研究[J]. 林产化学与工业, 2016, 36(1): 135-140.
[2]	李鑫, 顾夕梅, 绳敖楠, 张丽, 陈晓佩, 勇强. 双水相木聚糖酶水解体系制备木二糖及其纯化[J]. 林产化学与工业, 2015, 35(5): 93-97.
[3]	何敏超, 许敬亮, 袁振宏, 孔晓英, 张宇, 陈小燕, 梁翠谊. 纤维素酶基因表达研究进展[J]. 林产化学与工业, 2014, 34(5): 169-174.
[4]	史通;宋向阳;欧阳嘉;勇强. 黑曲霉与里氏木霉混合发酵产β-葡萄糖苷酶[J]. 林产化学与工业, 2013, 33(5): 101-105.
[5]	赵晨;方浩;孔端男;朱均均;余世袁. 树干毕赤酵母对玉米秸秆蒸汽爆破水解液及其蒸馏釜底液中木糖的发酵[J]. 林产化学与工业, 2013, 33(4): 37-42.
[6]	单宗星;韦策;李鑫;宋向阳;张杨;张伟炜;徐晨琛. 介孔氧化钛与海藻酸钠固定化木聚糖酶的对比研究[J]. 林产化学与工业, 2013, 33(1): 64-68.
[7]	孔端男;白合超;曹贤婷;吴博杰;余世袁. 树干毕赤酵母戊糖发酵影响因素的研究[J]. 林产化学与工业, 2012, 32(6): 61-68.
[8]	张宁;蒋剑春;杨静;卫民;赵剑;童娅娟. 低能离子注入法诱变选育纤维素酶产生菌的研究[J]. 林产化学与工业, 2012, 32(5): 29-33.
[9]	赵晨;方浩;孔端男;余世袁. 树干毕赤酵母在水解液中的驯化及木糖发酵[J]. 林产化学与工业, 2011, 31(6): 78-82.
[10]	李志和;张丽;李鑫;朱均均;余世袁;勇强. 培养基组成对里氏木霉合成纤维素酶的影响[J]. 林产化学与工业, 2011, 31(3): 55-59.
[11]	欧阳嘉;刘明;李鑫;陈牧;连之娜. 重组木聚糖酶生产低聚木糖的实验研究[J]. 林产化学与工业, 2011, 31(2): 37-42.
[12]	杨桂花;穆永生;陈嘉川;张凤山. 酶处理对混合杨木P-RC APMP浆打浆性能的影响[J]. 林产化学与工业, 2010, 30(5): 45-50.
[13]	杨桂花;王治艳;陈嘉川;陈克复. 新型AU系列木聚糖酶预处理对杨木硫酸盐浆漂白性能的影响[J]. 林产化学与工业, 2009, 29(S1): 133-137.
[14]	方浩;宋向阳;赵晨;常铮;储洁;勇强. 里氏木霉与黑曲霉混合发酵产纤维素酶的研究[J]. 林产化学与工业, 2009, 29(6): 15-19.
[15]	闫巧娟;翟倩;江正强. 链霉菌Z18中一种木聚糖酶(XynA)的纯化和性质[J]. 林产化学与工业, 2009, 29(4): 17-22.